A csontvelő aspirátuma segít a nem gyógyító sebek kezelésében.

Klinikai vizsgálatot végeztek a csontvelő aspirátumának hatékonyságáról a nem gyógyuló sebgyulladás kezelésére szolgáló eszközként. Ennek a kezelési módnak a felismerése a tudósok az immunmoduláló hatásra, a szöveti regeneráció stimulálására és a hematopoiesisre támaszkodtak.

Az aspirátumot úgy kaptuk meg, hogy a csontvelőt a beteg ileumjából aspiráltuk, és közvetlenül a sebfelületre visszük fel. Serkentő eredményeket kaptunk: a hét folyamán több mint 50% -kal csökkent a sebfelszín, az epithelizáció stimulálása és a vaszkularizáció volt megfigyelhető, a sebek megtisztultak a nekrotikus elemekből, ami fontos volt a sebgyógyulás szempontjából. A szerzők megjegyzik, hogy ez a technika nagy jövővel rendelkezik, de további klinikai vizsgálatokra van szükség a betegek jelentős kontingensén.

A csontvelő aspirátuma segít a nem gyógyító sebek kezelésében.

Klinikai vizsgálatot végeztek a csontvelő aspirátumának hatékonyságáról a nem gyógyuló sebgyulladás kezelésére szolgáló eszközként. Ennek a kezelési módnak a felismerése a tudósok az immunmoduláló hatásra, a szöveti regeneráció stimulálására és a hematopoiesisre támaszkodtak.

Az aspirátumot úgy kaptuk meg, hogy a csontvelőt a beteg ileumjából aspiráltuk, és közvetlenül a sebfelületre visszük fel. Serkentő eredményeket kaptunk: a hét folyamán több mint 50% -kal csökkent a sebfelszín, az epithelizáció stimulálása és a vaszkularizáció volt megfigyelhető, a sebek megtisztultak a nekrotikus elemekből, ami fontos volt a sebgyógyulás szempontjából. A szerzők megjegyzik, hogy ez a technika nagy jövővel rendelkezik, de további klinikai vizsgálatokra van szükség a betegek jelentős kontingensén.

Csontvelő aspiráció

Mi a csontvelő törekvése?

A csontvelő-aspiráció olyan eljárás, amely magában foglalja a csontok belsejében levő lágy szövetekből vett mintát. A csontvelő a csontok belsejében található szivacsos szövet. Olyan sejteket tartalmaz, amelyek fehérvérsejteket, vörösvértesteket és vérlemezkéket termelnek nagyobb csontokban, például:

A leukociták segítenek a fertőzés elleni küzdelemben. Az eritrociták oxigént és tápanyagokat tartalmaznak. A vérlemezkék sűríthetik a vért.

Ha a teljes vérszám azt jelzi, hogy a vörösvértestek, a leukociták vagy a vérlemezkék száma vagy funkciója rendellenesen magas vagy alacsony, az orvos megvizsgálhatja a csontvelőt, hogy segítsen meghatározni az okot. A csontvelő aspirációt gyakran olyan csontvelő biopsziával végezzük, amely más típusú tű használatával eltávolítja a szövetet a csontvelőből.

Miért történik a csontvelő aspirációja?

Számos állapot áll összefüggésben az egészségtelen csontvelővel. Ha az előzetes vérvizsgálata alacsony fehérvérsejteket vagy vérlemezkéket vagy vérlemezkéket mutat, orvosa elrendelheti csontvelő aspirációját. A vizsgálatot a betegség ellenőrzésére, valamint egy adott betegség előrehaladásának vagy kezelésének ellenőrzésére használják.

A csontvelő-problémákkal kapcsolatos állapotok és betegségek a következők:

  • anémia, amely a vörösvértestek száma
  • a csontvelő betegségei, mint például myelofibrosis vagy mielodiszplasztikus szindróma
  • vérsejtek, például leukopenia vagy policitémia
  • csontvelő vagy vérrák, például hemokromatózis leukémia vagy limfóma
  • , amely egy genetikai betegség, amelyben a vérben a vas képződik
  • , különösen a krónikus betegségek, például a tuberkulózis
  • tárolási betegségek, például amiloidózis vagy Gaucher-kór

A csontvelő aspirációja szintén fontos teszt lehet, ha rákos kezelést kap. Ez segít meghatározni, hogy a rák terjedt-e a csontra.

Milyen kockázatokkal jár a csontvelő törekvése?

A csontvelő-vizsgák biztonságosak, de minden orvosi eljárás valamilyen kockázatot hordoz. Ritka esetekben a következő komplikációk lehetségesek:

  • allergiás reakció az érzéstelenítésre
  • túlzott vérzés
  • fertőzés
  • hosszú távú kényelmetlenség

A kockázatok ritkák, és leggyakrabban olyan körülményekhez kapcsolódnak, amelyek gyengített immunrendszert vagy alacsony vérlemezkeszámot okoznak. A gyengült immunrendszer jobban érzékeny lehet a fertőzésre, és az alacsony vérlemezkeszám növeli a túlzott vérzés kockázatát.

Hogyan kell felkészülni a csontvelő aspirációjára?

El kell mondania kezelőorvosának, hogy milyen gyógyszereket szedhet, beleértve a pulton kívüli gyógyszereket vagy a táplálék-kiegészítőket is, és arról is tájékoztatnia kell őket. Orvosa kérheti, hogy hagyja abba bizonyos gyógyszerek szedését az eljárás előtt. De ne hagyja abba a gyógyszerek szedését, kivéve, ha orvosa ezt adja.

Tájékoztassa orvosát, ha ideges az eljárás során. Enyhén nyugtató hatásúak lehetnek, amelyek segítenek az eljárás során.

Az eljárás előtt kövesse az orvos utasításait.

Hogyan történik a csontvelő aspirációja

Felkérik, hogy változtassa meg a kórházi ruhákat, és feküdjön az oldalán vagy a gyomorban. A testedet ruhával borítjuk, így csak a vizsgálati terület lesz látható.

Orvosa ellenőrizni fogja a szívfrekvenciáját és a vérnyomását a csontvelő aspirációja előtt.

Az eljárás megkezdése előtt helyi érzéstelenítést kap, hogy megdöbbentesse azt a területet, ahol az aspiráció megtörténik. Ez általában a csípőízület hátsó részének tetején van. Előfordulhat, hogy a szegyből lehet venni.

Orvosa egy kis metszést fog tenni, ami megkönnyíti az üreges tűk behatolását a bőrön. Ezután a tű belép a csontba. Orvosa a tű hátulján lévő fecskendőt használja a csontvelő folyékony részének kihúzásához.

Közvetlenül a beavatkozás után a bemetszést bekötik, és egy másik szobába megy, hogy hazaérjenek.

A csontvelő aspirációja után

Az eljárás után egy héttel kicsit fájdalmat érezhet. Általában OTC fájdalomcsillapítókkal adhatja be. Önnek is gondoskodnia kell a bemetszés sebéről. A sebet 24 órán át szárazon kell tartani.

Miközben vigyáz a sebére, csontvelőmintát küldünk egy laboratóriumba tesztelés céljából. Orvosa a nyomon követési megbeszélés során felülvizsgálja a vizsgálati eredményeket.

A hematopoiesis rosszindulatú rendellenességeihez kapcsolódó csontvelő-aspirátum mikroszkópos vizsgálata - két módszer összehasonlítása a diákok elkészítéséhez

Számos neoplasztikus hematopoetikus rendellenesség diagnosztizálása során a csontvelő aspirátumok mikroszkópos vizsgálata szükséges. 2008-ban a Nemzetközi Hematológiai Szabványügyi Bizottság a csontvelő mikroszkópos értékeléséhez kétféle tárgylemezt ajánlott: egy ék alakú fóliát és a filmet zúzó lemezeket. Mivel ezeket a módszereket még nem hasonlították össze, ilyen összehasonlítást végeztünk. A különböző neoplasztikus hematológiai rendellenességek miatt diagnosztizált 250 betegből származó normális csontvelőmintákat értékeltek. A két összehasonlított módszer közötti fő különbségeket 13 nem-Hodgkin limfómában szenvedő betegben, hét szisztémás mastocytosisban szenvedő betegben és 11 akut leukémia vagy mielodiszplasztikus szindrómában vagy krónikus myelomonocytás leukémiaban szenvedő betegben találtunk. Különbséget figyeltek meg számos multiplex myelomában szenvedő beteg esetében is, de ezeknek az eltéréseknek a klinikai jelentősége meglehetősen szerény volt. A megfigyelt különbségek fő okai nyilvánvalóan a csontvelő vérrel való hígítása és számos neoplasztikus sejt fókuszos növekedése volt. Úgy véljük, hogy az összetörési technika nyereségesebb az ékhosszabbítású filmekhez képest. Ezért javasoljuk, hogy a csontvelő mikroszkópos vizsgálata alapján a diagnózis megállapításához vagy terápiás döntések meghozatalához elsődleges módszerként zúzófóliákat használjunk.

A csontvelő mikroszkópos vizsgálata a hematológiai egyik legfontosabb diagnosztikai eljárás. Az Egészségügyi Világszervezet (WHO) csontvelő és a nyirokrendszer rosszindulatú daganatai diagnosztizálására vonatkozó legfrissebb ajánlások szerint a csontvelő mikroszkópos vizsgálatának fontossága nem csökkent; inkább pontosabb morfológiai kritériumokat határoztak meg, ha szükséges, hogy elkerüljék a kétértelműséget.

Számos betegség esetében specifikusabb immunológiai vagy molekuláris markereket találtunk, amelyek a mikroszkópos vizsgálathoz képest sokkal pontosabb értékelést adnak az atipikus sejtek számáról. Az ilyen markerek azonban nem állnak rendelkezésre minden betegség esetében, és a mikroszkópos vizsgálat az egyetlen vagy fő módszer a diagnózis és a monitorozás során. Emellett olyan betegségek esetében, ahol a diagnózis genetikai módszereken vagy immunofenotipizáláson alapul, a csontvelő időszakos mikroszkópos vizsgálatai szükségesek, hogy gyorsan ellenőrizzék a transzformációs állapot különböző megnyilvánulásait vagy a másodlagos diszpláziás változásokat. A WHO besorolása nagyon magas elvárásokat támaszt a citológusokkal szemben, mivel a végső diagnózis gyakran a csontvelősejtek összetételének megfelelően becsült százalékán alapul. Klinikai gyakorlatunkban a különböző laboratóriumokban végzett, ugyanazon betegben végzett csontvelő aspiráció értékelése különböző eredményeket hozott, bár mindegyik értékelés ennek megfelelően történt. Ezeket a különbségeket főként két csúszás előkészítési módszer megléte okozza. A Nemzetközi Hematológiai Szabványügyi Bizottság (ICSH) a csontvelő mikroszkópos értékeléséhez kétféle lemez használatát javasolja: ék alakú film (1. technika) és szalmafólia (technika 2) csúszdák [1]. A két fent említett módszert még nem hasonlították össze a hematológiai rendellenességek esetén a diagnózis és a megfigyelés szempontjából releváns szempontok szerint. A vizsgálat célja az ékszaporodás és a filmbörlés módszereinek összehasonlítása, és annak meghatározása, hogy melyik alkalmasabb a hematológiai rendellenességek bizonyos csoportjainak diagnosztizálására és / vagy megfigyelésére.

A csontvelő-mintákat 250 betegből gyűjtöttük be, akiket diagnosztizáltak és kezeltek a Gdansk Orvosi Egyetem Hematológiai és Transzplantációs Tanszékén. A csontvelő aspirátumokat az ICSH ajánlásai szerint [1] a hátsó szemhéj gerincéből vettük. Elemeztük csak a részecskéket tartalmazó csontvelő aspirátumokat. Az egyes csontvelőmintákból származó kenetet mindkét technikával ugyanaz a szakember végezte, a felszívást követően legfeljebb 20 percig. Az 1. technikában a mintát egy üveglemezre mártottuk egy másik üveg szélével, míg a 2. technikában a részecskéket két üveglemez között préseltük. A May-Grunwald-Giems módszerrel történő festés után a tárgylemezeket mikroszkópos vizsgálatnak vetettük alá az ICSH iránymutatásainak [1] megfelelően. Az 1. módszerrel előállított tárgylemezeknél a csontvelő-részecskék előtt közvetlenül elhelyezkedő területeken embrió differenciált sejtszámot hajtottunk végre. A 2. módszerrel előállított tárgylemezeknél a csontvelő-részecskék körül csak jól elosztott csontvelősejteket elemeztünk. A jelentős számú sérült sejteket tartalmazó területeket kizártuk. A csontvelősejtek sűrűségét × 100 és × 400 növekedéssel értékeltük, és az alábbiak szerint: aplastic, nagyon alacsony, alacsony, közepes, magas vagy megnövekedett. Ugyanezeket a növekedéseket használtuk az alábbiakban leírt megakariociták számának becslésére: a megakariociták hiánya, a megakariociták nagyon kis száma, alacsony, közepes, magas vagy nagyon nagy számú megakariociták. Ezután a kiválasztott területeken nukleotidszámú differenciálsejtek számlálását végeztük (1. ábra). Legalább 1000 sejtet számoltunk. A sejteket az általánosan elfogadott szabványoknak megfelelően azonosították [2-4]. Az egyes sejtvonalak kvantitatív értékelését × 500 és × 1000 növekedéssel végeztük. A WHO ajánlásai szerint a diszpláziás változásokat kvalitatív módon értékelték 200 eritropoiesis és granulopoiesis és 30 megakariocitában (ahol lehetséges) [5]. Minden páciens esetében összehasonlítottuk és értékeltük mindkét technikával készített lemezeket, és minden esetben megpróbáltuk elemezni a lehetséges különbségek okát. Annak érdekében, hogy elkerüljék a különböző szereplők által végzett értékelésekhez kapcsolódó torzításokat, minden mikroszkópos vizsgálatot ugyanaz a személy vakon végzett. 1 1 (a) és 2 (b) technikával készült csontvelő-kenet, 100 × nagyítással (minden kép teteje) és nagyítás × 400 (minden kép alja)

A legtöbb változó rendellenes volt (Kolmogorov-Smirnov teszt, p 5%, ami a citológiai remisszió hiányát jelezte, 12 beteg esetében diagnosztizáltak, amikor a 2. módszerrel készített lemezeket értékeltük, és csak hét beteget készítettek a lemezek elkészítéséhez). 1. Annak ellenére, hogy az 1-es technikával előállított tárgylemezekben a robbanósejtek nem növekedtek egyértelműen, öt beteg esetében a 2. technikára vonatkozóan jelentős növekedést mutattak ki. 5. táblázat: 5. táblázat: AL-kezelt terápiás betegekből gyűjtött csontvelő-aspirátumokban a domén sejtek százalékos arányának klinikailag jelentős különbségei

A csontvelő mikroszkópos vizsgálata hosszú ideig az egyik legfontosabb diagnosztikai eljárás a hematológiában. Ezért nagyon fontos tudni, hogy a vizsgálat során a különböző betegségekre jellemző diagnosztikai eredményeket lehet kimutatni az alkalmazott dia-előkészítési módtól függően. Bár néhány olyan különbséget mutattunk ki, amelyek úgy tűnik, függenek a neoplasztikus hematopoetikus betegségek valamennyi csoportjában alkalmazott dia-előkészítési technikától, nem mindegyikük klinikailag jelentős volt. Például, függetlenül az alkalmazott technikától, a limfocitás infiltráció a B-CLL diagnosztikája volt. A fennmaradó rendellenességek többségében azonban a kritikus értékek különböznek a mikroszkópos vizsgálat során feltárt eredmények között, az alkalmazott módszertől függően.

A nem-Hodgkin limfómában a lymphocytás infiltráció értékelése mindig legalább két okból nehéz a csontvelő mikroszkópos vizsgálata. Először is, a csontvelő beszivárgása gyakran fókuszban van; másodszor, néhány, a perifériás nyirokrendszerből származó limfóma sejt vérrel léphet a csontvelőbe, néha korlátozott mértékű infiltrációra utal. Az összehasonlítás azt mutatta, hogy a 2. módszer hasznosabb volt a csontvelő-infiltráció lymphoproliferatív folyamatok, főként a fókusz jellegzetességek alapján történő értékelésére, amely összhangban van a közzétett ajánlásokkal [1]. Az ezzel a módszerrel nyert lemezek következtetései jobban korreláltak a trepin biopsziák vizsgálatának eredményeivel. A 2. módszer némi nehézséget okoz az értelmezésben, különösen akkor, ha a csontvelőben jóindulatú limfociták vannak jelen, amelyek mind a csontvelőben, mind a gyulladásos folyamat által érintett csontvelőben jelentkezhetnek. Az ilyen aggregátumok mérete változó lehet, jól elkülönülnek a környező hematopoetikus sejtektől, és többféle érett limfocitából állnak, amelyek több limfoid sejtet, hisztocitákat, plazma sejteket és makrofágokat tartalmaznak a limfociták között. A csontvelő aspirátumokban jelenlévő limfoid aggregátumok gyakorisága általában nem haladja meg a 20% -ot; a boncolási vizsgálatok azonban a biopsziák 62% -ában mutatták ki őket [6, 7]. Az ilyen limfoid sejtek aggregátumának összetétele gyakran jelezheti a természetüket. Az érett limfociták helyett többé-kevésbé polimorf limfoid formák nagy aránya rosszindulatú infiltrációt jelezhet. Az áramlási citometriát gyakran az ilyen aggregátumok klonális eredetének ellenőrzésére szolgáló módszerként említik [6]. Az áramlási citometriás vizsgálatok negatív eredménye azonban nem zárja ki azt a tényt, hogy a neoplasztikus limfoid aggregátumok még mindig jelen lehetnek a csontvelőben. A fent említett okok miatt a csontvelőbe fókuszos lymphoproliferatív infiltrációt igazoló legpontosabb módszer a trephine biopszia [8].

Az elmúlt években a multiplex myeloma diagnosztikai kritériumai jelentősen megváltoztak, és jelenleg a csontvelőben lévő plazma sejtek százalékos aránya nem tekinthető meghatározónak a diagnózis megerősítésére. A ≥30% és 10–29% -os plazmasejtek számát, amelyet „alap” és „kisebb” többszörös mielóma-kritériumként definiálnak (a WHO korábbi osztályozása szerint), már nem használják. Becslések szerint a legtöbb betegben az első diagnózis során megerősített plazmasejtek aránya ≥10%. Ez a feltétel nem áll fenn a myeloma multiplexben szenvedő betegek körülbelül 10% -ánál [9]. Ebben a vizsgálatban kimutattuk, hogy a plazmasejtek százalékos arányai különösen nagyok a csontvelőben lévő plazma sejtek aggregált növekedésének jellegével összefüggésben használt lemezek előállításának módjától függően. Így a patológia rutinszerű vizsgálata és a technológia 2 alkalmazása mikroszkópos vizsgálatokhoz teljesen indokolt. Jelenleg az MM diagnózisának megerősítése érdekében meg kell mutatni, hogy a csontvelőben van jelen egy plazmasejt-klón, amely más módszereket, például áramlási citometriát igényel. Az áramlási citometriát azonban nem lehet a mikroszkópos vizsgálat helyettesítőjének tekinteni [10]. A szerzők kimutatták, hogy bár az áramlási citometriás vizsgálat megerősíti a plazmasejt-klónok jelenlétét a csontvelőben, a plazmasejtek aránya jóval alacsonyabb, mint a morfológiai vizsgálatoknál, gyakran nem haladja meg az 5% -ot sem. Ezért indokoltnak tűnik, hogy nem javasoljuk az áramlási citometriát a plazmasejtek beszivárgásának mértékének meghatározására, amelyet a patológiás vizsgálatokkal vagy mikroszkópos vizsgálatokkal kell értékelni a 2-es módszerrel kapott lemezekkel.

A csontvelő stroma részét képező zsírsejtek főként a csontvelő részecskékre lokalizálódnak. Tehát ezek a sejtek ritkán láthatók a részecskéktől távol, és ha az 1. módszer szerint előállított dián több távoli hízósejt van, ez arra utalhat, hogy a csontvelőben a hízósejtek tényleges száma sokkal nagyobb. Azonban ez a növekedés nem ad információt a hízósejtek számának e növekedésének okairól, ami a reaktív gyulladásos folyamatnak tudható be. A csontvelő részecskékben lokalizált hízósejt-aggregátumok erősen jelzik a proliferációs folyamatot [11]. Ilyen aggregátumokat figyeltünk meg a legtöbb, a 2. technikával kapott lemezen, amelyet az SM véglegesen igazolt diagnózisával rendelkező betegektől kaptunk. Az 1. technikával előállított tárgylemezekben az ilyen aggregátumokat nem lehetett felismerni csontvelő részecskékben. Csak néhány árbocsejt áll rendelkezésre, úgy tűnik, nem lehet pontosan meghatározni az atipikus formák százalékos arányát, ami a CM diagnosztizálásának egyik kritériuma [12]. Ezért az SM-re vonatkozó mikroszkópos vizsgálatokat a 2. módszer szerint elkészített tárgylemezekkel kell elvégezni. Az 1. módszerrel előállított tárgylemezeknél a csontvelő képe általában nem volt világos és nem egyértelmű, és az SM-re jellemző változások csak akkor tapasztaltak, ha jelentős behatolás történt jelen volt. Hangsúlyozni kell azonban, hogy a trepin biopsziája minden szisztémás masztocitózis gyanúja esetén szükséges.

A csontvelő mikroszkópos vizsgálata abszolút fontos az AL, MDS és CMML diagnózisa szempontjából. A korábban használt francia-amerikai-brit osztályozás ezeket a tumorokat csak a citológiai és citokémiai jellemzők alapján minősítette [13, 14]. A diagnosztikai kritériumok jelentősen javultak immunofenotípust, citogenetikai és molekuláris tesztek hozzáadásával. Számos értékes adat értékeli a trefin biopsziát, amelyet mindig mielodiszplasztikus szindróma gyanúja esetén kell elvégezni. Ennek ellenére a tartományi sejtek százalékos megkülönböztetése szempontjából továbbra is döntő fontosságú a mikroszkópos értékelés. Emellett nincs jobb módszer a csontvelőben lévő robbanás mennyiségének becslésére. A CD34 + sejtek számolásán alapuló áramlási citometria-analízis nem helyettesítheti a mikroszkópos vizsgálatot, mivel nem minden robbanásveszélyes sejt expresszál CD34 antigént. Ezen túlmenően az áramlási citometriás analízis nagymértékben függ a csontvelő hígításától a vér, valamint a csontvelő fibrosisától [15]. A fenti korlátozások tévesen alacsony százalékos tartományt eredményezhetnek. Az MDS jelenleg használt osztályozása nem csak a megnövekedett dysplasia jelenlétének megerősítésén, hanem a vérben és a csontvelőben lévő robbanásveszélyes sejtek számán alapul. Ez az utolsó paraméter jelentős prediktív értékkel rendelkezik, és a nemzetközi előrejelző rendszer létrehozásához szükséges három paraméterben szerepel, amely viszont terápiás döntések meghozatalára szolgál [16]. Azt tapasztaltuk, hogy mindkét dia-előkészítési technika egyaránt érzékeny a diszpláziás anomáliák kimutatására. A 2. módszer előnyös a vérlemezkeszámok értékelésénél: a megakariociták száma általában jóval magasabb, és a magok formájában megjelenő részletek könnyebben láthatók. Ha azonban a diszplázia minőségi jellemzői gyengeek, és a robbanások száma a domináns anomália, az 1. módszer használata hamis negatív eredményekhez vezethet, és nem teszi lehetővé az MDS diagnózisának megerősítését. A doménsejtek számának különbségei az MDS-ben nyilvánvalóan nemcsak a csontvelő hígításával társultak a perifériás vérrel, hanem azzal a ténnyel is, hogy a robbanási sejtek a csontvelő részecskékben klaszterekké alakíthatók. Ezek a részecskék jól láthatóak a trefin biopsziás vizsgálatokban, általában az MDS fejlettebb formáiban [15]. Ezért úgy gondoljuk, hogy a 2. módszer megbízhatóbb az MDS diagnosztizálására, és jobban korrelál a betegek klinikai képével.

A csontvelő-készítmény mindkét módszerében klinikailag szignifikáns különbségek gyakran kapcsolódnak a többszintű mielodiszplázia vagy szekunder leukémiákkal összefüggő akut leukémiákhoz. Gyakran előfordul, hogy a myododysplasztikus szindrómát, amint azt az 1. módszerrel nyert lemezek jelzik, a 2. módszer szerint kapott akut leukémiaként ismerik el. célszerű az 1-es vagy 2-es technikával előállított tárgylemezekből a legmagasabb arányban használni a robbanósejtek számát. Ez a megközelítés megfelel a krónikus krónikus kritériumoknak a krónikus myeloid leukémia [17].

A kemoterápia hatásainak monitorozása akut leukémia esetén valószínűleg a legpontosabb diagnosztikai módszereket igényli, amelyek főként immunológiai és / vagy molekuláris módszereken alapulnak. A mikroszkópos vizsgálat elvesztette jelentését, mivel rendszerint nem nyújt sok modern terápiás kezelési módot. Vizsgálatunkban kimutattuk, hogy az 1. módszerrel végzett csontvelő-értékelés remissziót mutatott, míg a 2. módszerrel végzett vizsgálat a 2. módszerrel kizárt remissziót. Az áramlási citometriás vizsgálatoknak az 1. technikával kapott jelzésekhez hasonló robbanási mennyiséget kell mutatniuk. Emlékeztetni kell arra, hogy a terápiás döntések meghozatalakor az áramlási citometria általában alacsonyabb számú domén sejtet érzékel, mint amilyennek lehet.

A bemutatott eredmények igazolják, hogy a csontvelő mikroszkópos vizsgálata több daganatos hematopoetikus betegségben szenvedő betegeknél eltérő eredményeket hozhat a lemez elkészítéséhez használt módszertől függően. A 2. technikával (pl. A fókuszos limfociták vagy árbocsejtek beszivárgása) könnyen előforduló jelentős tünetek nagy része nem figyelhető meg az 1. technikával előállított tárgylemezeken. Másrészt, bizonyos speciális helyzetekben (pl. a nyálkahártyás nyiroksejtek), az 1. módszer jobban megőrzi az egyetlen sejt morfológiáját. Ezért teljes mértékben támogatjuk az ICSH irányelveit, amelyek kimondják, hogy a mikroszkópos vizsgálatot ezen technikák bármelyikével készített lemezekkel kell elvégezni. Úgy véljük, hogy a 2. technika előnyösebb az 1. technikával összehasonlítva. Ezen túlmenően a 2. módszerrel nyert lemezek eredményei jobban korrelálnak a klinikai kép eredményével és a trepin biopszia vizsgálatával. Ezért a csontvelő mikroszkópos vizsgálata alapján javasoljuk a 2. módszer alkalmazását a diagnózis megállapítására vagy a terápiás döntések meghozatalára.

Összeférhetetlenség A szerzők nem jelentenek összeférhetetlenséget.

Nyílt hozzáférés Ez a cikk nem kereskedelmi célú Creative Commons Attribution licenc alatt kerül forgalomba, amely bármilyen nem kereskedelmi célú felhasználást, terjesztést és másolást tesz lehetővé bármilyen médiumon, feltéve, hogy az eredet (ek) és forrása jóváírásra kerül.

Mi a csontvelő-szúrás, és mit mutat az elemzés?

A csontvelő-szúrás egy diagnosztikai módszer, amelyet a vér- és hematopoetikus rendszerre ható betegségek megfigyelésére vagy azonosítására használnak. A szúrást az anémia, a leukémia és más hematológiai betegségek kizárására vagy megerősítésére is használják. A csontvelő vizsgálata a fizikai vizsgálat és a betegtörténet alapján történik. A cikkben megvizsgáljuk, hogy mi az - csontvelő punkció.

Mi a csontvelő-szúrás?

Az eljárás megkezdése előtt a hólyagot és a beleket ki kell üríteni, és a szúrás napján nem javasolt más diagnosztikai vizsgálatok vagy sebészeti eljárások.

A csontvelőt őssejtek alkotják, amelyek nagy differenciálatlan sejtek. Az őssejtek két fő típusa létezik, így a csontvelő kétféle sejtszövetből áll. Az egyik típus részt vesz a vérsejtek előállításában, a másik a stromasejtek előállításában.

A csontvelő-aspirációt elsősorban a morfológia értékelésére és a differenciált sejtek számának megállapítására használják. Az aspiráció során nyert anyagot citogenetikai, molekuláris, mikrobiológiai, immunhisztokémiai és citometriás módszerekkel lehet vizsgálni.

A biopszia és az azt követő szövettani vizsgálat lehetővé teszi a csontvelő általános sejtességének értékelését, a gyulladásos elváltozások azonosítását és a különböző patológiás mikroorganizmusok beszivárgásának mértékének meghatározását.

A betegek érdekeltek: honnan származik a csontvelő? Szúrás közben a csontvelőt egy speciális tűvel eltávolítják a medence csontjából vagy a szegycsontból. A laboratóriumban a vérsejtek különböző érettségi szintjei észlelhetők. A myelogram segítségével azonosíthatja a vér vagy a hematopoetikus rendszer betegségeit.

A csontvelő-mintákat aspirálással vagy biopsziával lehet előállítani. Az aspirációs módszerrel kapott minta félig folyékony, ezért egy patológus vizsgálhatja meg fénymikroszkóppal, és áramlási citometriával, citogenetikussal, kromoszóma analízissel és polimeráz láncreakcióval (PCR) elemezhető.

A trepanobiopszia olyan szúrási biopszia, amelyben szilárd csontvelő szövetet veszünk. A mintát immunhisztokémiai elemzésre lehet használni. A fő diagnózis tisztázására leggyakrabban egy csontvelő trepanobiopsziát használnak.

bizonyság

A csontvelő punkcióját akkor végezzük, ha az orvosnak gyanúja van a vér- és hematopoetikus rendszerbetegségnek.

  • Az anaemia, a leukémia, a csontvelő aplasia diagnózisa vagy ellenőrzése;
  • A csontvelő-áttétek diagnosztizálása (más szervektől származó tumorok terjedése);
  • Az őssejtek átültetése.

A leukémia a leggyakoribb csontvelőbetegség. A "leukémia" kifejezés magában foglalja a különböző rosszindulatú betegségeket, amelyek mindegyike hasonló, mivel a limfociták prekurzoraiból származnak. Ezek a megváltozott sejtek fokozatosan elterjedtek a vörös csontvelőben, és ezáltal befolyásolták a vér normális képződését. Belépnek a véráramba is, ahonnan behatolnak a nyirokcsomókba, a lépbe, a májba és más belső szervekbe. Ezen túlmenően a funkcionális vérsejtek hiánya betegeknél vérszegénységet okoz.

Ellenjavallatok

Ha a cukorbetegség dekompenzált formája nem ajánlott a csontvelőben.

A csontvelő vizsgálatának számos ellenjavallata van. Az egyetlen abszolút ok, amiért a vizsgálatot nem lehet elvégezni, a súlyos vérzés, mivel az eljárás után vérzés léphet fel.

Ha a csípőízületben súlyos fertőzés alakult ki, egy másik helyet kell megválasztani a vizsgálathoz. A csontvelő aspiráció és a biopszia kockázat nélkül is elvégezhető még extrém thrombocytopenia (alacsony vérlemezkeszám) esetén is.

Lehetséges szövődmények

Egy éles szúrás súlyos fájdalmat okozhat. Ez a rövid és éles fájdalom gyorsan leáll; a megfelelő fájdalomcsillapítók is csökkenthetik. Ritka esetekben a csontvelő-szúrás a következő szövődményeket okozhatja:

  • Vérzés és fertőzés a szúrási helyen;
  • A szomszédos szervek és szöveti struktúrák trauma és gyulladása;
  • Légzőszervi vagy szív- és érrendszeri betegségek nyugtatók vagy fájdalomcsillapítók bevezetésével.

Szúrással - mint más vizsgálatoknál és kezelési eljárásoknál - potenciálisan nemkívánatos szövődmények fordulhatnak elő. Sok páciens aggodalomra adhat okot a szúrás okozta súlyos fájdalom miatt. A megmagyarázhatatlan betegségek következményei azonban súlyosabbak lehetnek, mint az eljárás fájdalma.

Egyéb káros hatások:

  • Hematomák és tályogok;
  • Sepsis (vérmérgezés);
  • Perforációk és sérülések (szomszédos szervek, idegek, vérerek).

A csontvelőt ambuláns vagy fekvőbeteg alapon lehet szúrni (a Belső Orvostudományi Kar, Hematológia, Onkológia). Attól függően, hogy milyen helyzetben van, szükség van a kezelőorvos tanácsára vagy utasítására.

Eljárás haladás

Paracetamolt vagy más fájdalomcsillapítót lehet alkalmazni a fájdalom enyhítésére néhány napig.

Először az aszpirációs punkciót hajtjuk végre. A szívófejet a bőrön keresztül kézzel kell behelyezni, amíg el nem éri a csontot. Ezután a tű áthalad a periosteumon (merev külső csontréteg) az agyüregbe. Amint a tű belép a csontvelő aspirátumába, folyadékot veszünk. Ez bizonyos pontosságot igényel az orvos mozgása során az eljárás során annak érdekében, hogy elkerüljük a mintában a megnövekedett vértartalmat.

Ha nem elegendő az aspiráció, akkor a csontvelő területén biopsziát végeznek. Nagy tűt használnak, amelyet a csont kéregbe helyeznek és rögzítenek. Ezután a tűt csavaró mozdulattal helyezzük be, és a csontvelő szilárd anyagának megszerzéséhez fordítjuk. A kapott mintát eltávolítjuk a betegből a tűvel együtt. Az eljárás időtartama 10-15 perc lehet.

Ha a csontvelő rosszindulatú változása gyanúja merül fel, punch biopsziát is el lehet végezni. A laboratóriumban az eltávolított szövetet mikroszkóp alatt lehet vágni, festeni és megvizsgálni. A leggyakrabban gyerekeknél punch biopsziát végeznek.

Az eljárás befejezése után a beteg általában 5-10 percig fekszik le. Ezt követően, ha nincs vérzés, a páciens felállhat és visszatérhet a napi tevékenységeikhez. A páciens paracetamolt vagy más egyszerű fájdalomcsillapítót vehet fel a fájdalom enyhítésére 2-3 napig. A fájdalom, a bőrpír, a láz, a vérzés vagy a duzzanat súlyosbodása orvosi segítséget igényel. A fertőzés elkerülése érdekében a betegeknek nem javasoljuk, hogy 24 óráig mossák a szúrást.

A tanulmány előkészítése

A véráramlást befolyásoló gyógyszereket az eljárás előtt egy héttel le kell állítani.

A csontvelő-szúrás egy rövid járóbeteg-eljárás. A szívfrekvencia, a vérnyomás és egyéb értékeket az orvos egy órán keresztül ellenőrzi. Ha a beteg az eljárás előtt fájdalomcsillapítót vagy nyugtatót kap, tilos egy napot autóval vezetni. Az eljárás esetleges következményeinek elkerülése érdekében először mindig orvoshoz kell fordulni. Az orvos elmondja Önnek, hogy milyen gyógyszereket vagy intézkedéseket nem ajánlott az eljárás előtt. Néha nagyon fájdalmas lehet az eljárás során. Általában súlyos fájdalom hiányzik.

A szúrás előtt az orvos megkérdezi a beteget a megelőző betegségekről és a megelőző napon bevitt gyógyszerekről. Ha a páciens a vért vékony anyagokat használja, tájékoztassa erről orvosát. Az aszpirint és más, a véráramot befolyásoló gyógyszereket az eljárás előtt egy héttel le kell állítani.

találatok

Mit mutat a csontvelő-szúrás? A csontvelő punkció vizsgálatát számos betegség azonosítására használják, beleértve a következőket: leukémia, multiplex myeloma, lymphoma, anaemia és pancytopenia. A vérről sok információt szerezhetünk rutinszerű kutatással - általános vagy biokémiai vérvizsgálatokkal. A betegségek eredetének megismeréséhez azonban néha szükség van a vérsejtek vizsgálatára.

Az aspiráció során nem minden vérsejt látható mindig; bizonyos helyzetekben - például a limfómában - a sejtek a csont trabeculumaiban agglutinálnak, és nem a szinuszokban, így nem gyűjtik össze, vagy nem láthatók a csontvelő-analízisben.

Ár hol

Moszkvában és a moszkvai régióban a csontvelő-szúrás átlagos költsége 500 orosz rubel. A myelogram - a csontvelő pontjainak vizsgálata - körülbelül 2500 rubelt áron jár. Számos tanulmány ára egy adott magánklinikán vagy önkormányzati kórházon múlik. Ezért célszerű a végső költséget közvetlenül az orvosi központban megadni.

A nem-Hodgkin limfómákban a csontvelő károsodásának diagnózisának modern lehetőségei trepanobioptát anyagon

Szerzők: E.V. Chigrinova, A.I. Pavlovskaya GU RCRC őket. NN Blokhina RAMS, Moszkva

A csontvelő (KM) bevonása a perifériás nehodkine limfómákba (NHL) a betegségek e csoportjának egyik szabályos fázisa. Az NHL tanulmányozásának főbb indikációi a következőképpen fogalmazhatók meg:

  • a lymphoma kezdeti diagnózisának meghatározása;
  • a folyamat dinamikájának értékelése a kezelés során;
  • a kapott remisszió minőségének értékelése;
  • a teljes remisszió ellenőrzése;
  • cellularitás értékelés KM.

Az NHL csontvelő inváziója különböző diagnosztikai szinteken, a fénymikroszkópiától a molekuláris biológiai vizsgálatokig megállapítható. Mindegyik vizsgálat esetében mind a meglehetősen világos kritériumok vannak a neoplasztikus limfoid populáció azonosítására, másrészt a lehetőségek objektív korlátozására. Mint ismert, a vizsgált KM anyag két fő típusa van: aspirátum (natív sejt szuszpenzió) és trepanobioptat (osteomedulláris henger). A csontvelő aspirátum egy sejt szuszpenzió, amely lehetővé teszi a hematopoiesis elemeinek kvalitatív-kvantitatív citológiai jellemzőinek megadását, valamint bármely normális és patológiai sejt alpopuláció immunofenotípusának vizsgálatát áramlási citofluorimetriával (PC). A trepanobiopszia célja egy komplex morfológiai vizsgálat, amely lehetővé teszi, hogy a hematopoetikusán kívül a csont- és a sztromás szövetek állapotáról is információt szerezzen. Ennek a kiadványnak a célja egy olyan kísérlet volt, hogy a trepanobioptat szintjén a CM tanulmányozásának modern módszereinek lényegét elérhetővé tegyék.

A trepanobiopszia lehetővé teszi, hogy jobban értékelje a CM szerkezetét (a lymphoid infiltráció jelenléte vagy hiánya, a CM-ben való eloszlás jellege, és különösen a lymphoid infiltráció helye a laminált csont gerendák tekintetében), valamint a hematopoiesis állapota általában, a zsír- és hematopoietikus szövetek aránya. az utóbbiak sejtessége, a CM és a csont gerendák jellemzésére, különösen a retikulin és a kollagén szálak eloszlására és súlyosságára, az osteoblasztok és az osteoklasztok aktivitására, a növekedés szélességére. üregek stb. A limfóma-károsodás extramedulláris károsodásának hiányában vagy technikai elérhetetlenségében, a KM aspirátum patológiás limfocitózisának hiányában a trepanobioptum KM a diagnosztikai anyag egyetlen forrása lehet. A aspirátumban a limfóma sejtek hiányához vezető okok közé tartozik a leukémiás klón sejtjeinek rendkívül kis száma, a limfóma fókuszban a szklerotikus változások súlyossága, valamint az adhéziós molekulák (MA) limfóma sejtjeinek expressziója, amelyek egyrészt a hemopoietikus terápiák terjesztését biztosítják a szövet és a stroma KM, és másrészt - meghatározza az intercelluláris és sejt-stromális kontaktusok erősségét [1]. Az ilyen intratissuláris kölcsönhatásokat biztosító ragasztók három szupercsaládhoz tartoznak: immunoglobulinok - ICAM-1, CD54, integrinek - aL (CD11a / LFA-1a), X (CD11c), 4 (CD49d / VLA-4), 1 (CD29), 2 (CD18), 3; valamint szelektinek - L-szelektin (CD62L), P-szelektin (CD62P). Természetesen ez nem az egész MA-k listája, amelyek meghatározhatják az NHL terjesztésének típusát a szervspecifikus tropizmussal. Az elmúlt évek szakirodalmában azonban az ilyen típusú MA-k kifejeződése összefügg a CM és a benne lévő limfómafókuszok építonikájának jellemzőivel [2]. P. Lucio és mtsai. [3] a CD11a, a CD11c, a CD18, a CD29, a CD44, a CD49d, a CD54, a CD62L és az NHL nosológiai variánsa közötti összefüggést és a kurzus agresszivitását ismertette. Munkájuk egyik érdekes eredménye az volt a feltételezés, hogy az NHL általánosságban, valamint az egyes nómológiákban az egyes altípusokba sorolható, az MA-expresszió immunológiai profiljának megfelelően. E. Horst et al. [4] összehasonlító értékelést ad a CD44 molekula expressziós szintjéről a normál B és T differenciálódás és az NHL különböző szakaszaiban. Adataik szerint a CD44 expressziója a leukemizáció nagy kockázatával rendelkező limfómáknak felel meg, és ennek a molekulának az expressziója fokozódik az NHL progressziójával. M. K. Angelopoulou et al. [5] a MA-expresszió immunológiai profilját is jellemzi a különböző NHL-ekben, kiemelve a CD44-t és a CD56-ot, mint az NHL-ben a CM-károsodás fő kockázati tényezőit.

Tehát vannak olyan tényezők, amelyek egyrészt hozzájárulnak az NHL leukemizációjához, másrészt akadályt jelenthetnek a limfóma sejtek számára, hogy belépjenek a KM aspirációs anyagába. Ilyen körülmények között a trepanobioptat CM a leukémiás szubsztrát vizsgálatának egyetlen CM-tétele lehet.

Megállapítást nyert, hogy a csontvelőt nagyobb gyakorisággal az alacsony fokozatú B-sejtes limfómák [6] befolyásolják, amelyek a WHO hematopoetikus és limfoid szövetek szerinti osztályozásának [7] szerint érett kissejtekből származó limfómákat tartalmaznak:

  • kis limfocita limfóma / B-sejt krónikus nyirokleukémia;
  • köpenysejt-limfóma;
  • csomópont limfóma marginális zóna;
  • extranodális MALT-típusú és a lép peremterülete;
  • follikuláris limfóma;
  • lymphoplasma lymphoma.

Morfológiai elemzés

A trepanobioptata-kutatás hatékonysága nagymértékben függ a biopszia megfelelőségétől. Néhány kutató szerint ez utóbbinak 2–3 cm hosszúnak kell lennie (legalább 1,5 cm-nél), és legalább 5 vagy 6 átmérőjű üregben kell lennie [8, 9]. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a CM cellularitása eltérő lehet a különböző közbenső üregekben. Nem lehet megbízhatóan értékelni egy kis CM-fragmentumot, különösen olyan esetekben, amikor az anyagot szubkortikális zóna képviseli, azaz terület a kortikális csont alatt. Ez a zóna általában kis sejt, különösen az időseknél. Ezenkívül minél több interpúziós üreg van jelen a biopsziában, annál nagyobb a valószínűsége a CM fókuszbeli elváltozásainak kimutatására. A trepanobioptata kutatás sikere kétségtelenül attól is függ, hogy a feldolgozás minden fázisa megfelelő-e: rögzítés, dekalcifikálás, öntés és hisztológiai szakaszok gyártása. Az elmúlt években megpróbálták módszeresen javítani a CM minden egyes feldolgozási stádiumát, amelyet elsősorban az immunhisztokémiai módszerek széleskörű bevezetése határoz meg a diagnosztikai folyamatban, különösen a CM-ben a limfoid infiltráció természetének és természetének meghatározására. Például a biopsziás anyag metakrilátgyantákba történő öntésére szolgáló eljárásokat javasoltak előzetes dekalcifikálás nélkül [10, 11]. Ugyanakkor hangsúlyozzuk, hogy ezek a módszerek túl drágák és időigényesek, és jó eredményeket érhetünk el, beleértve az immunhisztokémiai kutatást is, a szabványos szövettani módszer valamennyi szabályának és követelményének szigorú betartásával [11].

A trepanobiopsy KM főbb mutatói a következők:

  • gyanús limfóma;
  • lymphoma hisztotípus létrehozása;
  • a tumor-károsodás stádiumának meghatározása a terápiás és diagnosztikai folyamat minden szakaszában;
  • a kezelés eredményeinek nyomon követése a remisszió, a részleges remisszió, a tumor ismétlődése stb.


A CM-ben a limfoid infiltráció kimutatása nem azonos a lymphoma léziójával. A KM általában limfoid sejteket tartalmaz, amelyek a KM nukleáris sejtek teljes populációjának 15–20% -át teszik ki. Ezek érett sejtek és a T és B limfoid vonalak progenitor sejtjei. Az érett sejtek közül a T-limfociták többek, és a B-lineáris sejtek dominálnak a progenitor sejtek között. A limfoid sejtek intersticiálisan helyezkednek el a hemopoiesis elemek között, és kis csoportok - limfoid csomók - formájában lehetnek. A limfoid sejtek számának növekedése abszolút és relatív lehet a hematopoiesis csökkentése miatt, például hipoplasztikus körülmények között. Bármely KM-ben jóindulatú nyirokcsomók találhatók, bár gyakrabban fordulnak elő idős emberekben, nőkben, bizonyos hematológiai és nem hematológiai betegségekben, például reumatoid betegségekben [8], citomegalovírus-fertőzés, toxoplazmózis, fertőző mononukleózis és mások esetében. fertőzések, transzfúzió utáni szindróma [12-14] stb.

Négyféle jóindulatú nyirokcsomót írnak le [15, 16]: az első - a csíravonalral; a második - világos határokkal; a harmadik - szabálytalan egyenetlen kontúrokkal; a negyedik - a limfoid sejtek kis csoportjainak formájában. A limfoid sejtek mellett általában plazma sejteket, hisztocitákat, kapillárisokat, néha eozinofileket és hízósejteket, valamint egy pályázati reticulin hálózatot tartalmaznak. Ezek többszörösek lehetnek, általában intertrabeculárisak. Ismert, hogy a minimális limfóma-beszivárgás detektálása a tumor generalizálásának indikátora, és ezért fontos lehet a terápia prognózisa és tervezése szempontjából [17]. Ezért a limfoid infiltráció természetének tisztázása, a jóindulatú lymphoid infiltráció és a CM limfóma sérülése közötti differenciáldiagnózis kérdése rendkívül fontos, de ugyanakkor az egyik legnehezebb, és nem mindig megoldható szövettani kutatással, hanem immunhisztokémiai, molekuláris biológiai, genetikai módszereket.

A lymphoma CM károsodás és a jóindulatú limfoid infiltráció differenciáldiagnosztikájához, valamint a CM-ban a limfóma alosztályozásához használt fő szövettani kritériumok egyrészt a limfoid infiltráció topográfiai jellemzői, másrészt az infiltrátum sejtek morfológiai (nukleáris citoplazmatikus) jellemzői.

A csontvelőben a limfoid tumor infiltrációjának 3 fő típusa van: interstitialis, fókuszos és diffúz [8] (1. ábra).


Ábra. 1. Az NHL vereség KM típusainak sematikus ábrázolása [8]

Az intersticiális típusban a limfoid sejtek a CM sejtek között helyezkednek el anélkül, hogy megzavarnák a normális architektúrát és a hematopoiesist (2. ábra).


2. ábra: A B-CLL-ben a sérülés interstitialis típusa. Hematoxilinnel és eozinnal festett HC. 250

A diffúz típusú masszív lymphoid infiltrációt figyelték meg, amely teljes egészében vagy majdnem teljes egészében kitölti a zsír- és hematopoetikus szövetek éles csökkenését vagy teljes cseréjét. A lymphoid infiltráció fókuszfajtáját a fókuszok jelenléte jellemzi, leggyakrabban többször. A foci lehet intertrabecularis és / vagy paratrabecularis. A paratrabecularis lokalizáció különböző szélességű és hosszúságú limfoid sejtek rétegét képezheti, szorosan szomszédos a trabeculákkal, a stromális szklerózis jelei vagy a csont trabeculán fekvő lézió széles bázissal (3. ábra).


Ábra. 3 A tumor infiltrációjának paratrabekuláris növekedése a follikuláris limfómában. Hematoxilinnel és eozinnal festett HC. 200

A limfoid tumor infiltrációjának fókuszai az intersticiális üreg középső részében helyezkedhetnek el, azaz a baktériumok üregének középső részében, azaz az intersticiális üregben. intertrabekuláris. Ezek egy csomópont (4. ábra) lehetnek, amelynek középpontja (gyakrabban anélkül) reprodukció, vagy olyan sérülés, amely szabálytalan, rosszul körvonalazott határokkal rendelkezik.


Ábra. 4. A CM fókális léziója a marginális zóna limfómájában. Hematoxilinnel és eozinnal festett HC. 200.

Egy nagy lézió egy rövid távolságra lehet a trabeculákhoz képest, de ez a fajta lokalizáció a lymphoma fókuszban nem paratakuláris. Az intersticiális infiltrációs típus változata a tumorsejtek intrasinusoidális lokalizációja (5. ábra) [8, 18].


Ábra. 5. A tumor limfociták intrasinusoidális lokalizációja. Immunhisztokémia, színezés CD20-on

Egy másik típusú limfóma-infiltrációt leírtak: egysejtes diszperzió, melyben a hematopoiesis elemei között egyedi limfóma sejtek jelenléte minimálisan expresszált intersticiális típusú, a különböző típusú limfoid infiltrációk kombinációi, amelyek a vegyes típusúak. Például intersticiális diffúz, interstitialis-noduláris, intersticiális-intrasinusoidális [8, 11]. Figyelembe véve a limfóma infiltrációjának, a tumorsejtek morfológiai (nukleáris citoplazmatikus) jellemzőinek topográfiáját és a myelofibrosis jeleinek jelenlétét vagy hiányát az érintett területeken, egy algoritmust fejlesztettek ki a CM limfómák alosztályozására. A csak paratrabekuláris limfóma-infiltráció jelenléte kétségtelenül lehetővé teszi a follikuláris limfómáról való beszélgetést. A follikuláris limfómát az is jellemzi, hogy vegyes típusú infiltráció van, beleértve a baktériumok közötti fókuszt is, de a paratrabecularis lokalizáció nélkülözhetetlen jelenlétével. A limfóma sejtek intersticiális növekedése nagyon ritka, és a diffúz típus szinte nem található meg. Az infiltrátumok többnyire különböző méretű centrocitákhoz hasonló sejtekből állnak, a centroblaszt típusú egyedi sejtekkel. A CM-ben a domináns celluláris készítmény az 1. típusú follikuláris limfóma. Gyakran előfordul, hogy a nyirokcsomóban lévő follikuláris limfóma képe nem egyezik a sejtösszetételben a CM-ben megfigyelt képpel. Ezt a jelenséget ellentmondásnak nevezik. A CM-ben a follikuláris limfóma jellegzetessége a myelofibrosis, mely a limfóma-károsodásokban megfigyelhető a CM normál architektúrájának megszakadásának jelei nélkül.

A paratrabekuláris infiltráció kis fókuszai a köpenyzóna és a limfoplazma-limfóma limfómájában fordulhatnak elő, de kizárhatják a kis limfociták / B-krónikus limfocita leukémia limfómát. A köpenyzóna limfóma esetében a limfóma sejtek intersticiális és fókuszos intersticiális növekedési típusai jellemzőek [19]. Az utóbbiak homogén, kis és közepes méretű sejtek keverékei, amelyek a nukleáris membrán szabálytalan körvonalai. Néha a sejtek centrocytoid morfológiájúak, ami növelheti a hasonlóságot a follikuláris limfómával. A centroblasztok vagy immunoblasztok szerkezetével rendelkező nagy sejtek azonban nem találhatók. Fagocitózis jeleit mutató fényes citoplazmával rendelkező hisztociták jelenléte lehetséges. A myelofibrosis nem jellemző. Lymphoplasmacytic limfóma esetén a tumorsejtek intersticiális, fókuszos intersticiális és diffúz növekedési típusai jellemzőek. Paratrabecularis lokalizáció történik, de rendkívül ritkán [18]. A lymphoma-infiltráció önmagában történő lokalizációján alapuló limfoplazmita limfóma diagnózisa nem lehetséges. A meghatározó szerepet játszik a sejtkompozíció részletes jellemzése, amelyet olyan sejtek képviselnek, mint a kis limfociták, a plazma és a limfoplazmatikus sejtek, valamint egy kis számú immunoblaszt, plazmablaszt. A gyakori a myelofibrosis, a fókuszos vagy a diffúz, anélkül, hogy megzavarná a normál architektúrát [14].

Az intersticiális és / vagy diffúz típusú infiltráció esetén a gyökérképződéssel vagy anélkül először gyanúja van a kis limfociták / B-sejt krónikus limfocita leukémia lymphomájának. A pszeudofollikulumok jelenléte túlnyomórészt diffúz típusú tumornövekedés esetén, az infiltrátum sejtösszetételének jellemzői (kis limfociták, kerekített maggal, csomós kromatinnal) lehetővé teszik a lymphoma állítólagos hisztotípusának megerősítését. A kis limfociták / B-krónikus limfocita leukémia által okozott limfóma myelofibrosis nem jellemző.

A lép peremterületének limfóma, a keringő vaszkuláris limfocitákkal vagy anélkül, a CM tumorsejtek fókuszos bakteriális vagy diffúz infiltrációjával jellemezhető. A lymphoma sejtek lokalizációja a csontvelő szinuszaiban jellemzőnek tekinthető [20–22]. Az ilyen típusú beszivárgás más típusú limfómákban is előfordulhat [18], de túlsúlya esetén a lép perifériájának limfóma diagnózisa nagy valószínűséggel állítható elő. A csomópont és az extranodális MALT-típus határterületeinek limfóma ritkán jár a CM-val, de veresége esetén interstitialis-fókuszos infiltrációs típusú. A nagyméretű foci a csont-trabeculákhoz kapcsolódhat, a léziók némelyike ​​hasonlíthat a limfoid tüszőkre, tenyészállomásokkal és széles határterülettel rendelkezik, amely monocytoid morfológiájú sejtekből áll. A sejtkompozícióban kis- és közepes méretű limfoid sejtek vannak, kerekített magokkal, fényes citoplazma mérsékelt szélességével, valamint más plazmasejtek számával, kis számú aktivált limfoid sejtekkel. A perifériás nem-Hodgkin B-sejtes limfómák - diffúz nagysejtes limfóma és Burkitt-limfóma - agresszív variánsait elsősorban a tumorsejtek diffúz típusú növekedése jellemzi a CM-ban.

A perifériás T-sejtes limfómákban a CM veresége kevésbé gyakori, mint a perifériás B-sejtekben [23]. A perifériás T-sejt-limfóma szövettípusai:

  • meghatározhatatlan;
  • angioimmunoblasztos;
  • anaplasztikus nagy sejtek és a bőrön belüli T-sejt limfóma.

A perifériás T-sejt-limfómákban a KM-elváltozások gyakorisága igen változatos, ugyanúgy, mint a limfóma-szubsztrát lokalizáció típusai. A perifériás T-sejt-limfómák jellemzői közé tartoznak azok a képességek, hogy szignifikáns másodlagos változásokat okoznak a vaszkuláris proliferáció, granulomatikus reakció, eozinofília, mielofibrosis stb. Formájában. A perifériás T-sejt-limfómákban a KM-elváltozások ellenőrzésének egyik fontos problémája a differenciáldiagnózis a reaktív T-sejt proliferátumokkal, amelyek a tumorbetegségekben, például a kissejtes B-sejtes tumorokban, klasszikus Hodgkin-limfómában, Hodgkin limfóma noduláris limfoidjában, myelo-diszplasztikában találhatók., diffúz nagy B-sejtes limfóma, T-sejtekben és / vagy hisztocitákban gazdag, valamint nem tumoros állapotokban: autoimmun betegségek például a reumatoid arthritis és a polimialgia, számos vírusos és bakteriális fertőzés, stb. [23].

A szövettani információk értelmezése nem mindig egyszerű, és a legtöbb esetben a hisztológiai vizsgálaton alapuló helyes diagnózis nem lehetséges. A hisztopatológus és a hematológus közötti szoros együttműködés szükségessé teszi további kutatási módszerek széles körű alkalmazását, mint például az immunofenotipizálás, és bizonyos esetekben molekuláris biológiai és genetikai elemzés.

immunfenotipizálás

A trepanobioptum CM (osteomedulláris henger) heterogén anyagsűrűség: a csontkomponens sűrű anyag, a hematopoetikus szövet laza, félig folyékony anyag. Az immunológiai reakciók elvégzéséhez ultraszintű szakaszokat kell készíteni, amelyek megkövetelik az összes szövettani komponens egységes sűrűségét. Ez a csontszerkezetek lágyításával vagy a hematopoetikus szövet tömörítésével érhető el. Az első esetben a csont-lecsengést hajtjuk végre, a második hatást a metakrilátgyantákon alapuló vagy alacsony hőmérsékleten (-700 ° C-ig) alacsony hőmérsékleten (-700 ° C) lévő oldatba öntjük, és mindkét módszer nem igényel dekalcifikációs eljárást [24, 25]. A trepanobiopátok fagyasztása ideális az antigén determinánsok megőrzéséhez, míg a metakrilátgyanták alkalmazása kiváló minőségű hisztológiai készítményeket eredményez [10, 11]. Jelenleg, amint azt már említettük, a dekalcifikáció módszerét leggyakrabban a rutin gyakorlatban alkalmazzák, majd az anyagot paraffinba öntjük. A módszer kiválasztása történeti kiválasztás eredményeként történt, figyelembe véve a gazdasági megvalósíthatóságot és a technikai hozzáférhetőséget.

Függetlenül attól, hogy milyen szövettani protokollt alkalmaztunk az anyag feltöltésére, az anyag immunológiai festését egyetlen elv alapján hajtjuk végre, amely a kérdéses antigén reakcióján alapul - egy monoklonális antitest. A trepanobiopta hisztológiai előkészítése csak a festék típusát érinti, amellyel egy pozitív reakciót egy morfológus olvashat. Így a kriosztátos vágások esetében a fluoreszcens festékek alkalmazása optimális, paraffin vagy metakrilátgyantákba ágyazott anyag esetében, a kromogének láthatóak a fénymikroszkópia szintjén. A CM trepanobioptátjainak anyagának vizsgálatára szolgáló immunológiai módszerek fejlődése a CM paraffin szakaszaiban az immunenzimátumok (immunhisztokémia - IHC) megválasztásához vezetett. Az érthetőség érdekében összehasonlíthatja az összes festési módszert (lásd a táblázatot).

Táblázat. Különböző festési módszerek összehasonlítása az anyag trepanobiopta KM kezelésére szolgáló protokolltól függően

Az orosz Rákkutató Központ hemopoiesis immunológiai laboratóriumában az összes bemutatott módszert tesztelték. Előnyben részesítjük az IHH-t immunfluoreszcenciával kombinálva a paraffin szekciókban [26, 27]. Nyilvánvaló, hogy a CM trepanobioptátjainak immunfenotípusozása technikailag nehéz és gazdaságilag költséges folyamat, ezért egyértelműen megfogalmazott indikációkat igényel a vezetéshez.

Általánosságban elmondható, hogy az NHL-ben a CM immunofenotipizálásának fő feladatai:

  • a neoplasztikus limfoid infiltráció kimutatása;
  • különböző limfómák differenciáldiagnózisa;
  • differenciáldiagnózis reaktív folyamatokkal.

A feladatok megoldásának prioritása természetesen a KM aspirátum modern áramlási citofluorimetriájának kell lennie. Az NHL-ben a KM trepanobioptátumok immunhisztokémiai vizsgálatára vonatkozó jelzések még szűkebbek. A vizsgálatot a következőképpen kell elvégezni:

  • ha a CM kóros lymphoid infiltrációja észlelhető, és nincs lehetőség a szívóáramú citofluorimetriára;
  • a sejtek jelentős hiánya esetén, vagy a lymphomákban lévő limfociták teljes számának alacsony százalékában, amelyet a CM károsodásának magas előfordulása jellemez;
  • a CM-t átfogó vizsgálat részeként CD5-negatív variánsokkal (follikuláris, a marginális zóna összes limfóma változata);
  • a reaktív és tumor plazmacitózis differenciáldiagnosztikájára, a plazmasejtek kis százalékos arányával az aspirátumban;
  • minden esetben, ha a lymphoid infiltrációban a gyanús gyomoros trepanobioptát KM-ben csak egy anyagot észlelünk.

A T-sejt NHL-ben előnyben kell részesíteni a QC-t is, mivel az antigének koexpressziója a legtöbb limfóma diagnosztikája. Ezen túlmenően nehézségek merülnek fel az antitestek a - és ?? - T-sejtes receptorokhoz való felhasználásában, amelyek meghatározzák a neoplasztikus T-limfociták klonalitását a CM paraffin szakaszain. Az összes T-lineáris NHL-ből származó trepanobioptát integrált immunmorfológiai vizsgálatához anaplasztikus nagysejtes limfóma szükséges (ACL), mivel a csontvelő-invázió sajátos típusa - az egyes sejtek hematopoiesis elemei közötti monodiszperzió formájában -, amely csak immunhisztokémiai szempontból határozható meg. A világadatok szerint ennek a variánsnak a leukemizációja százalékos aránya körülbelül 30, míg a KM aspirátum vizsgálata általában nem informatív [28-30]. Például A.I. Slugina [31], amely a gyermekek nagysejtes limfómáinak szentelték, a KM két károsodásának két pontjából nem észlelték az egyik KM-aspirátumban a nyolc és az extranodális elváltozások morfoimmunofenotípusa alapján megállapított AKL diagnózis alapján.

M. Fraga et al. [32] a biopsziás minták rutin szövettani vizsgálata során a betegek mindössze 17% -ában károsodott, és a további immunhisztokémiai festés során a betegek 23% -ában CD30 és epithelialis membránantigén (EMA) elleni monoklonális antitesteket használtak. A munkájukban szereplő 42 esetben az egyes tumorelemek diszpergálódtak a normális hematopoetikus sejtek és az adipociták között. Az AKL csontvelő-behatolásának hasonló szövettani jellemzőit Y. Sadahira et al. [16] és C. Bayle et al. [33].

Ami a B-NHL-t illeti, a CM-ban lévő trefin biopsziás minták immunofenotípusának objektív diagnosztikai értéke nem azonos a különböző variánsok esetében, ezért a módszer fő diagnosztikai képességei egyértelműbbek a nosológiákkal összhangban. Például a B-sejtes limfocitás leukémia / kis limfocita limfóma (B-CLL / LML) és a szőrös sejt limfocita leukémia a kifejezett immunofenotípusos tulajdonságok mellett nagy potenciállal rendelkezik a leukemizációra (> 90%), ami a patológiai lymphocytosis stabil megjelenésében tükröződik a CM aspirátumban [7, 8, 14]. A PC-vel történő aspirátum átfogó immunmorfológiai vizsgálata alapvetőnek tekinthető, mivel csak a PC lehetővé teszi kettős és hármas fluoreszcens jelölés használatát a diagnosztikai marker koexpressziójának értékeléséhez: CD23 és CD5 B-CLL / LML és CD103 és CD25 esetén ON-val a CD19 + limfociták felületén [34, 35].

A perifériás vér és a aspirátum teljes leukémiás képével rendelkező trepanobiopszia szükségessége nem teljesen egyértelmű. Ha néhány szerző a korábbi évek szakirodalmában a CM-infiltráció különböző típusainak prognosztikai értékét támasztja alá a B-CLL-ben [36, 37], mások később visszautasítják azt [38, 39]. Ezt követően a tumor biológiai agresszivitásának megbízhatóbb jeleit azonosítottuk, mint például a nehéz láncok variábilis régióit kódoló gének jelenlétét, a CD38 molekula expresszióját és a 2-mikroglobulin magas szintjét [40, 41].

Mantle sejt lymphoma (LKM)

A CM LKM veresége a betegek mintegy 75–80% -ánál fordul elő [42–48], és a B-CLL-szel ellentétben a perifériás vér leukémiás fázisa csak a betegek 50% -ában található. P. L. Cohen és mtsai. [49] a CM-károsodás legnagyobb százalékát (93) írta le a köpenyes zóna limfómában 46 beteg anyagánál. A szerzők ezt az eredményt minden beteg esetében szigorúan kétoldalú trepanobiopszia anyagának vizsgálatával magyarázzák. A leológiás klinika immunofenotípusának meghatározására szolgáló elsődleges eljárást PC aspirátumnak kell tekinteni, amely lehetővé teszi a CD5 antigén meghatározását a klón B limfocitákon és a CD20 molekula expressziós szintjét. Ennek ellenére elégséges eseteket gyűjtöttek össze ehhez a limfómához az immunológiai markerek rendellenes expressziós profiljával: a CD5 expressziója nélkül a CD23 [50] pozitív expressziójával, CD5 és CD23 [51], CD5 és CD10 [42, 44], CD10 expressziója CD5 nélkül Ezen túlmenően a limfóma fő pathognomikus jele a WHO besorolásának (2001) megfelelően a ciklin D1 túlexpressziója, a transzlokációval (11; 14) összefüggő, a 14. kromoszómán és a bcl-lokuszon lévő immunglobulinok nehéz láncait kódoló gének lokuszát befolyásoló hatása. 1 (ciklin D1) x-re omosome 11 [53-57]. Úgy véljük, hogy ez a genetikai esemény fontos szerepet játszik a köpenyzóna limfóma kialakulásának patogenezisében, mivel a ciklin D1 (a sejtciklus fehérje - szabályozója) túlzott expressziója gátolja a G1 fázisátmenet határán lévő sejtet? S. Cyclin D1 a nukleáris membránon expresszált fehérjékre utal, így az egyetlen módja annak meghatározására, hogy ma az immunhisztokémiai módszer [58] (6. ábra).


Ábra. 6. A ciklin D1 nukleáris expressziója csontvelő-szubsztrát limfóma sejtekkel a köpenysejtekből. Immunhisztokémia, SW. 250

Tehát elmondható, hogy a leukémiás klón LMC-vel való immunfenotípusának elsődleges meghatározása a PC használata során a legkényelmesebb, de a diagnózis végső azonosításához a trepanobioptate CM immunhisztokémiai vizsgálata szükséges.

Folikuláris limfóma (FL)

A statisztikai adatok szerint a QM PL-ben való részvételét az esetek [60, 60] 40–60% -ában határozzák meg, és a tumorsejtek keringését a perifériás vérben a betegek kevesebb, mint egyharmada határozza meg [8].

A PL-re jellemző QM szklerotikus változásainak súlyossága, és valószínűleg az adhéziós molekulák expressziójának profilja gyakran megakadályozza a neoplasztikus sejtek beszívódását [61–63], ezért a biopsziás szövettani vizsgálat az extramedulláris tumor ismert immunofenotípusával a KM kutatás fő módszere. A lymphoma szubsztrát centrocita-centroblaszt-összetételű lokalizációjában a "aranydiagnosztikai szabvány" létezése a PL - paratrabekulyarnogo lokalizációjában lehetővé teszi a morfológus számára, hogy korlátozza a standard standard KM szintjét immunhisztokémiai festés nélkül.

A PL-ben végzett immunhisztokémiai vizsgálat szükséges a CM minimális maradék infiltrációjának meghatározásához a remisszió teljességének értékelése során [64]. Azonban minimális számú B-sejt esetében a természetük értékelése már meghaladja az IHC képességeit, és csak az immunglobulin-gének klonális átrendeződésének vagy a pathognomon transzlokáció t (14; 18) definíciójának alapján lehet elvégezni.

Marginal limfóma (LMZ)

A WHO osztályozásban (2001) a limfoid tüszők vagy periarterioláris limfoid csatolások marginális köpenyének sejtjeiből származó lymphomák 3 fő típusát különböztetjük meg. Ezek az LMZ a lép lépése, az LMZ csomópontja, valamint a nyálkahártyákkal (MALT) kapcsolatos variáns.

A lép LMZ-jében különböző források szerint a CM-károsodás leggyakoribb az esetek [65–68] 67–100% -ában, a MALT-limfómák mintegy 20% -ában [65, 69, 70]. A CM-nak a csomópont-változattal való bevonása casuisztikának tekinthető, ami azonban a nómológia ritkaságával magyarázható [12, 71, 72]. Az immunofenotipizálás stádiumában az LMZ diagnózisa valószínűbb az eliminációs módszerrel, mivel a tipikus immunológiai marker egyesületek nincsenek meghatározva. A pan-B-lineáris antigének expressziója jellemző a CD5, CD23, CD10 molekulák együttes expressziójának hiányában [1, 73–77]. Az LMZ-csoporton belüli differenciáldiagnózis esetén hasznos lehet figyelembe venni a felületi immunoglobulinok expressziójának bizonyos különbségeit. Tehát a lép LMZ-jére az IgM +, IgD + molekulák koexpressziója jellemző, míg a csomópont variáns esetében csak IgM molekulák vannak jelen IgD hiányában [7, 78]. Ebben a tanulmányban szeretném összpontosítani az LMZ variánsára, amely a legmagasabb tropizmussal rendelkezik a hematopoetikus szövetek esetében. Meg kell jegyeznünk, hogy a lép LMZ-ével rendelkező betegek számának nehézségei vannak a splenectomiában, ezért a diagnosztikai teher gyakran a lymphoma rendelkezésre álló leukémiás szubsztrátjára esik.

A KM LMP-jében a KM aspirátum patológiás limfocitózisa lehetővé teszi a limfóma-elemek fenotípusának citometrikus és citogenetikus vizsgálatát [8, 79]. Mivel ez a limfóma nem rendelkezik kellően tipikus immunológiai és citogenetikai jelekkel (a kromoszóma deléciója kevesebb, mint 40% -ban fordul elő, a 3-as kromoszóma triszómiája kevesebb, mint 17%), minden további diagnosztikai információ hasznos a diagnózis megerősítéséhez, például egy adott típusú növekedés meghatározásához. lymphomák a CM (WHO) trepanobioptátában. Az LMZ-lépek esetében két patognomonikus szövettani típusú növekedést írtak le - intrasinusoidális és noduláris [8, 14]. Az első típusban a mikrovaszkuláris ágy edényei belsejében lévő tumor „édességek” meghatározása nem mindig lehetséges a trepanobiopats KM standard festett szakaszainak vizsgálatakor - csak akkor, ha immunhisztokémiai festést alkalmazunk a pan-B-sejt markerek monoklonális antitestjeivel (7. ábra) [27].


Ábra. 7. A „édes” tumorsejtek intrasinusoidális lokalizációja a lép LMZ-ben. Immunhisztokémia, színes CD20, SW. 200

A barna kromogénnel (DAB) festett patológiai limfociták lineáris struktúrákat képeznek a CM által eltömődött szinuszok (mikrovesszerek) mentén. A noduláris típus a második LMZ-ben a második leggyakoribbnak tekinthető. Az interstitialis hely, a maradék csíraképző központok megőrzése (változó tulajdonság) és a kifejezett zónálisság [8, 14, 80]. Az említett egyesület morfológiai jellemzői meghatározza hasonlóságot patológiás csomók reaktív limfoid tüszőket, így nyilvánvalóan lefolytatása immunhisztokémiai vizsgálatok trepanobioptate CM nodális típusú limfóma beszűrődé LMZ lépben is szükség, és a tanulmány, amellett, hogy a differenciál diagnózist egyéb kiviteli alakjai értelmében a perifériás B-sejt-kissejtes A limfóma magában foglalja a limfoid infiltráció reaktív természetének kizárását. A limfóma-infiltrátumok neoplasztikus természetének további jele a CD21, CD23 és CD35-re pozitív follikuláris dendritikus sejtek hálózatának kialakulása, amely nem jellemző más B-NHL variánsokkal, valamint reaktív csomókkal való infiltrátumokra (8. ábra) [14, 80, 81].


Ábra. 8. A follikuláris dendritikus sejtek hálózata a LISS lymphoma csomókban. Immunhisztokémia, szín CD21-en

A MALT leukemizációja, amint azt már beszámoltuk, meglehetősen ritka [65, 69, 70]. Ezekben a limfómákban azonban elég sűrű T-sejt reaktív limfoid infiltrátumok detektálhatók. Ezen infiltrátumok természetének meghatározása, kivéve a MALT-tel való helyes állást megalapozó specifikus KM-károsodást, csak immunfenotípusozással lehetséges [82].

B-NHL plazma sejt

A CM trepin biopsziás mintáinak immunhisztokémiai vizsgálata figyelemre méltó differenciáldiagnosztikai tesztnek bizonyult a CM-aspirátumban a plazma sejtek alacsony százalékos arányával a paraproteinémiában szenvedő betegeknél, akiknél feltételezett kezdeti myeloma (MM) vagy a kezelt betegek minimális maradék betegségének ellenőrzése. Az immunofermentális és immunfluoreszcens módszerek kombinációja a CM trepanobiopathiáinak anyagán (9. ábra) [27, 83] optimálisnak tekinthető az informativitás szempontjából. Az immunhisztokémia lehetővé teszi a plazma sejtek számának, helyének és citológiai jellemzőinek meghatározását. Dupla fluoreszcens jelzett antitest alkalmazása immunglobulin könnyű láncokra? és? lehetővé teszi a mono- vagy poliklonális plazmasejtek meghatározását egy látómezőben.


Ábra. 9. Reaktív plazmacitózis. és - immunhisztokémiai színezés CD138-on (syndecan-1); b - immunfluoreszcens festés kombinált jelzett antitesttel? (zöld ragyogás) /? (sárga fény)

Az 1. ábrán A 9. ábrán látható, hogy a barna kromogénnel festett plazma sejtek érett megjelenéssel rendelkeznek, hiányoznak a nukleáris atípia, és pericapilláris (a sinus mentén) találhatóak. A reaktív plazmacitózisra minden jel a legjellemzőbb. Az 1. ábrán 9b. Ábra - fluoreszcens mikroszkóp sötét mezőjében az immunglobulinok a- és p-láncát hordozó plazmasejtek aránya megközelítőleg azonos (a + + enyhe dominancia), azaz pl. sejtek nem klónosak. A multiplex myeloma diagnózisa kizárt.

Agresszív B-NHL: diffúz B-sejtes nagysejtes limfóma (DL) és Burkitt limfóma (LB)

A CM-károsodás meghatározása a jellemző morfológiájú változatokban meglehetősen egyszerűnek tűnik, és az extramedulláris komponens ismert immunofenotípusa esetében csak a trephine biopszia vagy CM aspiráció morfológiai vizsgálata korlátozhatja. Különösen érdekes a nemkívánatos kissejtes limfoid infiltrátumok vizsgálata a CM-ban, különösen számos B-NHL-sel, különösen DL és LB-vel. A modern irodalomban a DLBL-vel való disszonáns szövettani helyzetek jelenségét ritkán tárgyaljuk. Összefoglalva az összes rendelkezésre álló irodalmi anyagot, három fő oka lehet a különbségtételnek [17, 84]:

  • átalakulás agresszívebb variánssá (nagy sejt NHL). Az FL és B-CLL (Richter szindróma) legjellemzőbb, és a tumor progressziójának morfológiai megnyilvánulása;
  • reaktív folyamat. Kisméretű sejtinfiltrátumok a CM-ban, ellentétben az extramedulláris DCL-tel, T-sejt-természetűek, a CD4 + / CD8 + populációk eltérő arányával;
  • igazi biclonitás. Két különböző immunmorfológiai és molekuláris biológiai klón jellemzővel rendelkező két limfoproliferatív folyamat egyidejű együttélése. Az ilyen többes számú folyamatokat összetettnek is nevezik.

Az orosz Orvostudományi Akadémia Rákkutató Központjának hemopoiesisának laboratóriumában végzett munkában, a diszkriminatív limfoid kissejtes infiltrátumok immunológiai vizsgálatában a DVCL-ben szenvedő betegeknél (20 beteg) igen érdekes eredményeket kaptunk. A limfoid infiltrátumok minden esetben a reaktív T-sejtek által képviseltek. Bizonyos esetekben a T-komponens immunhisztokémiai vizsgálata nagy B-sejteket azonosított a nyilvánvaló atípia jeleivel, hasonlóan a centroblasztokhoz és az immunoblasztokhoz, amelyeket a DCL csontvelő inváziójának kezdeti jeleinek tekintettek. Ezekben az esetekben a CM immunológiai képe megfelel a T-sejtekben gazdag DLT variánsnak (10. ábra), míg az extramedulláris tumor minden betegnél klasszikus DLBL volt.


Ábra. 10. A disszonáns kissejtes limfoid infiltráció IHH-je az extranodális DLBC-ben szenvedő beteg CM-jében. a - a CD3 festése (T-sejt komponens); b - festés CD20-on (nagy diszkrét anaplasztikus B-sejtek)

A vizsgált csoport klinikai lefolyásának átfogó elemzésével megállapítottuk, hogy a T-sejtcsoportok kialakulásának tendenciája elsősorban a DLBC elsődleges extranodális lokalizációjával rendelkező betegeknél fordult elő. A CM-ben elsődleges csomópontokkal rendelkező betegeknél a DCL extramedulláris komponensének megfelelő tipikus diffúz diffúz infiltrációt észleltünk, és a T-sejt reaktív komponenst néhány izolált sejt képviselte (11. ábra).


Ábra. 11. A KM leukémiás szubsztrátjának immunhisztokémiai vizsgálata a DCL elsődleges csomópontjában. és - színezés D20-n: a nagysejtes struktúra tumorjának diffúz növekedése; b - a CD3 festése: néhány T-sejt szétszóródott. SW. 200

Megállapítottuk, hogy az LB-ben - a trepanobioptate KM immunhisztokémiai festésével - a diszkriminatív kissejtes limfóma-beszivárgást észleltük. A beteg LB-je a HIV-fertőzés hátterében fordult elő, és a T-sejt-infiltráció valószínűleg a betegségre jellemző szinitikus szerkezet.


Ábra. 12. A CM diszkriminatív kissejtes lymphoid infiltrációja LB-ben. IHH, festés CD3-on

A disszonáns helyzetek példája alapján kimutatták, hogy a trefin biopsziás minták immunofenotipizálása a tisztán gyakorlati értéken kívül kutatási szempontból is érdekes lehet. Például a kissejtes limfoid infiltrátumok reaktív T-sejtjeinek meghatározása a DLBL elsődleges extranodális lokalizációjával rendelkező betegeknél a limfóma ezen formájának magas immunogenitását jelzi az elsődleges csomóponthoz képest. A reaktív T-komponens alpopulációs összetételének további vizsgálata, valamint a különböző immunogenitású DLBL két formájának immunofenotípusának összehasonlítása világíthat a tumorellenes immunitás mechanizmusainak jellemzőire a limfómákban és a hemoblasztózisban általában.

Az IHH, mint bármely más módszer, természetesen korlátozza. Például a perifériás B-NHL vegyes-sejtes (T-és B-sejt) limfoidcsomóit korábban feltétel nélkül reaktívnak tekintették, de a molekuláris-biológiai módszerek kifejlesztésével lehetővé vált egy egyedi B-sejt-komponens kiértékelése. Ennek eredményeként sok publikáció jelent meg a trepanobiopszia archív anyagának retrospektív elemzésén, amelyben a szerzők bizonyították a „reaktív” infiltrátumokból izolált B-sejtek klónális természetét polimeráz láncreakcióval (PCR) [85, 86]. Valójában az immunofenotipizáláshoz képest a molekuláris diagnosztika, különösen a PCR, pontosabb, lehetővé teszi az alkalmazás jellemzőit meghatározó limfoid elemek minimális számának becslését, hogy a betegség kezdetén diagnosztizálja a minimális CM-infiltrációt, és ellenőrizze a remissziót.

Így elmondható, hogy a trepanobiopatikus KM anyagának vizsgálata modern módszerek alkalmazásával a legtöbb NHL-ben elengedhetetlen teszt, amely lehetővé teszi olyan fontos további diagnosztikai információk beszerzését, amelyek kritikusan befolyásolhatják a kezelési taktika tervezését. A legmegbízhatóbbnak kell lennie a CM aspirált és trefin biopsziájának komplex immunmorfológiai vizsgálatának (a CM-módszer alkalmazásával), a tumor extramedulláris komponensének (ha van) immunofenotípusának megállapítása [27, 83, 87–90]. A Hemopoiesis Immunológiai Laboratóriumában és a tumorbetegségek patológiai anatómiai osztályában A Blokhin RAMS átfogó megközelítést dolgozott ki a diagnosztikára, beleértve az NHL elsődleges szubsztrátjának paraffin blokkokba történő részletes szövettani vizsgálatát, részletes immunhisztokémiai módszerekkel friss anyagokra (kriosztát metszetek), CM-aspirátumok citokémiai és immunmorfológiai értékelésére, kiegészítve az IHC trepanobiopatákkal [91].

Az "Oncohematology" folyóiratból készült anyag, №1-2, 2006.